Gertruda se poprvé objevuje ve 2. scéně 1. dějství, když se snaží Hamleta povzbudit nad ztrátou otce a prosí ho, aby raději zůstal doma, než aby se vrátil do školy ve Wittenbergu. Její starost o něj pokračuje i ve druhém dějství, kdy se postaví na stranu krále Claudia a pošle Rosencrantze a Guildensterna, aby jejímu synovi zvedli náladu. Také místo toho, aby Hamletovo náhlé šílenství přičítala odmítnutí Ofélie (jak si myslí Polonius), věří, že příčinou je smrt jeho otce, krále Hamleta a její rychlý, následný sňatek s Klaudiem: „Pochybuji, že to není nic jiného než to hlavní: smrt jeho otce a náš zbrklý sňatek.“ Ve třetím dějství dychtivě naslouchá zprávě Rosencrantze a Guildensterna o jejich pokusu rozveselit ho a podporuje králův a Poloniův plán sledovat Hamleta ze skryté pozorovatelny při jeho rozhovoru s Ofélií v naději, že ho její přítomnost uzdraví.
V dalším dějství Gertruda vypráví Claudiovi o Poloniově vraždě a je přesvědčena, že Hamlet je skutečně šílený. Projevuje také skutečný soucit a náklonnost, když spolu s ostatními sleduje, jak Ofélie zpívá a jedná v naprostém šílenství. Při Oféliině pohřbu vyjadřuje svou někdejší naději, že by se mladá žena mohla provdat za jejího syna: „Doufala jsem, že budeš ženou mého Hamleta.“ Když se Hamlet objeví a zápasí s Laertem, žádá ho, aby toho nechal a aby ho někdo zadržel – říká, že teď je sice v záchvatu šílenství, ale to se brzy zmírní. Na začátku hry Gertruda lže více svému manželovi než synovi, po scéně ve skříni se však celá situace prohodí.
V závěrečné scéně si Gertruda všimne, že Hamlet je během souboje s Laertem unavený, a nabídne mu, že mu otře čelo. Proti králově vůli vypije pohár s jedem, který král Hamletovi určil, a umírá, přičemž při pádu křičí v agónii:
„Ne, ne, ten nápoj,-O můj milý Hamlete-ten nápoj, ten nápoj! Jsem otrávená.“
Ostatní názory postav na královnu jsou převážně negativní. Když se Hamletovi zjeví duch jejího bývalého manžela, označí ji za „zdánlivě ctnostnou královnu“, ale nařídí Hamletovi, aby se s ní kvůli tomu nesetkával a nechal její soud na nebi. Jeho láska k ní za života však byla benevolentní, neboť Hamlet prohlašuje, že jeho otec by zadržel živly, kdyby „příliš hrubě navštívily její tvář“.
Hamlet ji vidí jako příklad slabosti žen (což ovlivňuje jeho vztah k Ofélii) a neustále ho zraňuje v úvahách o tom, jak rychle (za necelý měsíc) se znovu vdala.