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Por G.P. ThomasApr 15 2013

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Créditos de Imagem: khawfangenvi16/.com

Cromatografia líquida de alta performance ou cromatografia líquida de alta pressão (HPLC) é um método cromatográfico que é usado para separar uma mistura de compostos em química analítica e bioquímica de forma a identificar, quantificar ou purificar os componentes individuais da mistura.

Cromatografia líquida de alta performance (UHPLC) de fase reversa ou Ultra-high Performance Liquid Chromatography (UHPLC) é um modo de separação comumente usado. Proporciona retenção dinâmica de compostos que possuem funcionalidade hidrofóbica e orgânica. Uma combinação de interações do tipo hidrofóbico e van der Waals entre todo o composto alvo e as fases estacionária e móvel permite a retenção desses compostos por fase reversa.

Como funciona a HPLC?

Em quantidades muito pequenas, a mistura da amostra a ser separada e testada é enviada para um fluxo de fase móvel percolando através de uma coluna. Existem diferentes tipos de colunas disponíveis com sorbentes de diferentes tamanhos de partículas e superfícies.

A mistura move-se através da coluna a velocidades variáveis e interage com o sorbente, também conhecido como fase estacionária. A velocidade de cada componente da mistura depende de 1) sua natureza química, 2) da natureza da coluna e 3) da composição da fase móvel. O tempo em que um determinado analito emerge da coluna é denominado como seu tempo de retenção. O tempo de retenção é medido sob condições específicas e considerado como a característica identificadora de uma determinada substância a analisar.

Partículas absorventes podem ser hidrofóbicas ou polares na natureza. As fases móveis comumente usadas incluem qualquer combinação miscível de água e solventes orgânicos, como acetonitrilo e metanol. As fases móveis sem água também podem ser usadas.

O componente aquoso da fase móvel pode conter ácidos como ácido fórmico, fosfórico ou trifluoroacético ou sais para permitir a separação dos componentes da amostra. A composição da fase móvel é mantida como uma constante ou como variada durante a análise cromatográfica. A abordagem constante é eficaz para a separação dos componentes da amostra que não são muito diferentes em sua afinidade para a fase estacionária. Na abordagem variada, a composição da fase móvel difere de baixa a alta resistência à eluição. A força de eluição da fase móvel é refletida pelos tempos de retenção do analito onde a alta força de eluição produz eluição rápida.

A composição da fase móvel é escolhida com base na intensidade das interações entre vários componentes da amostra e a fase estacionária.

O processo de partição por HPLC é bastante similar ao processo de extração líquido-líquido, exceto que o primeiro é um processo contínuo, ao contrário do segundo que é um processo por etapas. É recomendado que os processos de particionamento experimental sejam realizados para determinar o método exato de HPLC que proporcionaria a separação adequada.

Fabricantes de Sistemas HPLC

Existe hoje uma ampla gama de opções de HPLC no mercado. A seguir está uma lista de vários produtores de sistemas de HPLC com uma breve introdução de seus produtos:

• Dionex, uma empresa baseada na ciência da cromatografia, fabrica o sistema UltiMate® 3000 Rapid Separation LC, o sistema UltiMate 3000 RSLCnano e a família Corona® de detectores universais de aerossóis carregados.
• Jasco Analytical Instruments fornece uma gama de sistemas de HPLC. Os sistemas de HPLC da série LC-2000 Plus são configuráveis de forma única. Com alto desempenho e baixo custo, estes sistemas de HPLC podem ser adaptados a praticamente qualquer requisito, desde o simples QA isocrático até ao desenvolvimento avançado do método multi-solvente/multi-coluna. O Isocratic LC-2000plus-Iso é fornecido com uma bomba, desgaseificador, auto-amplificador e detector UV/Vis. A bomba é projetada com vazões de 1µL a 10mL/min a pressões de até 500 bar para uso com colunas de 2, 3, 4, 6 e até 10mm de diâmetro interno. O Gradiente Binário LC-2000plus-HPG é similar ao sistema isocrático, mas é fornecido com uma configuração de bomba com gradiente de dois solventes. As vazões da bomba são compatíveis com colunas de 1mm. O Gradiente Quaternário LC-2000plus-LPG também é similar ao sistema isocrático; entretanto, este modelo é fornecido com uma configuração de bomba de gradiente quaternário para máxima flexibilidade de solvente.
• O Sistema HPLC Preparativo da Gilson tem uma ampla faixa de vazão que pode ser adaptada tanto para separações semi-preparativas quanto preparatórias. Sua alta potência de bombeamento permite uma ampla gama de tamanhos de colunas preparatórias. O sistema foi concebido com um novo sistema de estação de enxaguamento compreendendo uma lavagem com jacto de água e permite a utilização de até dois solventes de enxaguamento diferentes.
• Sharp™ Os sistemas HPLC da AAPPTec são fornecidos com bombas que são controladas por microprocessador, permitindo assim caudais altamente precisos e precisos, o que pode ajudar a obter uma excelente reprodutibilidade analítica e a maior precisão de medição.

Outros fabricantes no mercado actual são a Agilent, Beckman Coulter, Bio-Rad e Buck Scientific.

Benefícios do HPLC

Os principais benefícios dos sistemas HPLC são os seguintes:

• Controla e automatiza a instrumentação cromatográfica
• Provê gestão de dados, características de segurança, e relatórios e validação de instrumentos.

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• Poderoso e adaptável
• Aumentar a produtividade através da gestão de todas as áreas de análise – da amostra ao instrumento, e da separação aos resultados do relatório.
• Adestável

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Aplicações de HPLC

A principal finalidade da técnica de HPLC é identificar, quantificar e purificar um determinado analito ou composto. Tanto a análise quantitativa como a qualitativa podem ser feitas. Os HPLC podem ser usados nas seguintes aplicações:

• Purificação da água
• Detecção de impurezas nas indústrias farmacêuticas
• Pré-concentração de componentes vestigiais
• Cromatografia de troca de proteínas
• Cromatografia de troca de proteínas
• Anião de alta-pHcromatografia de troca de carboidratos e oligossacarídeos

Fontes e Leitura Adicional

• Cromatografia HPLC/UHPLC de Fase Inversa-Phenomenex
• Dionex Products-Dionex
• HPLC Systems-aapptec

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• Preparative HPLC System-Gilson

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Este artigo foi actualizado em 22 de Abril, 2019.

Escrito por

G.P. Thomas

Gary graduado pela Universidade de Manchester com uma licenciatura de primeira classe em Geoquímica e um mestrado em Ciências da Terra. Depois de trabalhar na indústria mineira australiana, Gary decidiu pendurar as suas botas de geologia e virar a sua mão para a escrita. Quando ele não está desenvolvendo conteúdo tópico e informativo, Gary geralmente pode ser encontrado tocando sua amada guitarra, ou assistindo o Aston Villa FC arrancando a derrota das garras da vitória.

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