Gertrude ses første gang i 1. akt, scene 2, da hun forsøger at opmuntre Hamlet over tabet af sin far og beder ham om at blive hjemme i stedet for at tage tilbage til skolen i Wittenberg. Hendes bekymring for ham fortsætter i anden akt, da hun tager kong Claudius’ parti ved at sende Rosencrantz og Guildenstern for at opmuntre sin søn. I stedet for at tilskrive Hamlets pludselige galskab til Ophelias afvisning (som Polonius tror), mener hun også, at årsagen er hans far, kong Hamlets død og hendes hurtige, efterfølgende ægteskab med Claudius: “Jeg tvivler på, at det er noget andet end det vigtigste; hans fars død og vores forhastede ægteskab.” I tredje akt lytter hun ivrigt til Rosencrantz og Guildensterns beretning om deres forsøg på at opmuntre ham, og hun støtter kongen og Polonius’ plan om at se Hamlet fra et skjult udsigtspunkt, mens han taler med Ophelia, i håb om at hendes tilstedeværelse vil helbrede ham.
I næste akt fortæller Gertrude Claudius om Polonius’ mord, overbevist om, at Hamlet virkelig er sindssyg. Hun viser også ægte medfølelse og hengivenhed, da hun sammen med de andre ser på, hvordan Ophelia synger og handler i absolut vanvid. Ved Ofelias begravelse giver hun udtryk for sit tidligere håb om, at den unge kvinde måske kunne have giftet sig med hendes søn: “Jeg håbede, at du skulle have været min Hamlets kone.” Da Hamlet dukker op og kæmper med Laertes, beder hun ham om at stoppe og om, at nogen skal holde ham tilbage – og siger, at han måske er i et anfald af vanvid nu, men at det snart vil aftage. I begyndelsen af stykket ligger Gertrude mere med sin mand end med sin søn; men efter skabs-scenen er hele situationen byttet om.
I slutscenen bemærker Gertrude, at Hamlet er træt under kampen med Laertes, og tilbyder at tørre hans pande. Hun drikker et bæger med gift, som kongen havde tiltænkt Hamlet, mod kongens ønske, og dør, idet hun skriger i smerte, mens hun falder:
“Nej, nej, nej, drikken,-O min kære Hamlet-Drikken, drikken! Jeg er forgiftet.”
Den øvrige personers syn på dronningen er overvejende negativ. Da hendes tidligere mands spøgelse dukker op for Hamlet, beskriver han hende som en “tilsyneladende dydig dronning”, men beordrer Hamlet til ikke at konfrontere hende med det og overlade hendes bedømmelse til himlen. Hans kærlighed til hende, mens han levede, var dog velvillig, da Hamlet udtaler, at hans far ville have holdt elementerne tilbage, hvis de “besøgte hendes ansigt for groft”.
Hamlet ser hende som et eksempel på kvinders svaghed (hvilket påvirker hans forhold til Ophelia) og bliver konstant såret i sine overvejelser over, hvor hurtigt (mindre end en måned) hun giftede sig igen.