Free Press

De fleste IHC/ICC-procedurer anvender fiksering af væv og celler ved hjælp af formaldehydbaserede fiksatorer. I nedenstående protokol beskrives teknikken til fremstilling af en 4 % formaldehydopløsning i PBS. Det mest effektive fiksationsmiddel skal bestemmes eksperimentelt.

Varsel: Formaldehyd er giftigt. Læs venligst sikkerhedsdatabladet, før du arbejder med dette kemikalie. Der skal bæres handsker og sikkerhedsbriller, og opløsningerne skal laves i en emhætte.

Læs venligst protokollen i sin helhed, før du går i gang.

Procedure

1. For 1 L 4% formaldehyd, tilsættes 800 mL 1X PBS til et glasbægerglas på en omrøringsplade i en ventileret emhætte. Opvarm under omrøring til ca. 60 °C. Pas på, at opløsningen ikke koger.
3. Tilsæt 40 g paraformaldehydpulver til den opvarmede PBS-opløsning.
4. Pulveret vil ikke straks opløses i opløsningen. pH-værdien hæves langsomt ved at tilsætte 1 N NaOH dråbevis fra en pipette, indtil opløsningen bliver klar.
5. Når paraformaldehydet er opløst, afkøles og filtreres opløsningen.
6. Opløsningens volumen justeres til 1 L med 1X PBS.
7. Ph-værdien kontrolleres igen, og den justeres med små mængder fortyndet HCl til ca. 6.9.
8. Opløsningen kan aliquoteres og fryses eller opbevares ved 2-8 °C i op til en måned.

Forskellen mellem paraformaldehyd, formaldehyd og formalin

Paraformaldehyd (kemisk navn er polyoxymethylen) er et pulver af polymeriseret formaldehyd, der i sig selv ikke kan fikserer væv. For at kunne anvendes som vævsfikseringsmiddel skal paraformaldehyd opløses i varmt vand for at blive til en formaldehydopløsning. Formalin er en mættet formaldehydopløsning i vand (37 vægtprocent, 40 volumenprocent), der indeholder 10-15% methanol. Methanol er tilsat for at bremse polymeriseringen til formaldehyd, hvilket reducerer formalins fikseringsevne. Formalin kan også fremstilles i en alkoholfri form af pulveriseret paraformaldehyd.