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IHC/ICCでは、組織や細胞をホルムアルデヒドベースの固定剤で固定する方法が一般的ですが、この固定剤に含まれるホルムアルデヒドの量を増やすことで、組織や細胞の固定にかかる時間を短縮することができます。 以下のプロトコルは、PBS中の4％ホルムアルデヒド溶液を生成するための技術について説明しています。 最も効果的な固定剤は実験的に決定される必要があります。 注意：ホルムアルデヒドは有毒です。 この化学物質を扱う前にMSDSを読んでください。 手袋と安全眼鏡を着用し、溶液はヒュームフード内で作成してください。

開始前にプロトコルをすべて読んでください。

手順

1. 1Lの4%ホルムアルデヒドを使用する場合。 換気フード内のスタープレート上のガラスビーカーに1×PBS 800 mLを加える。 攪拌しながら約60℃まで加熱する。 沸騰しないように注意する。
2. 加熱したPBS溶液にパラホルムアルデヒド粉末40gを加える。
3. 粉末はすぐに溶液に溶けない。
4. 溶液が透明になるまでピペットから1 N NaOHを滴下してゆっくりとpHを上げます。
5. パラホルムアルデヒドが溶解したら、溶液を冷却してろ過します。
6. 1×PBSで溶液量を1 Lに調整します。
7. pHを再確認し、希塩酸を少量加えて6程度になるように調整します。9。
8. 溶液は分注し、凍結または2～8℃で1ヶ月間保存できます。

パラホルムアルデヒド、ホルムアルデヒド、ホルミンの違い

パラホルムアルデヒド（化学名はポリオキシメチレン）はホルムアルデヒドを重合した粉末で、それ自体は組織の固定ができないため、パラホルムアルデビドの使用はできません。 組織固定剤として使用するためには、パラホルムアルデヒドをお湯に溶かしてホルムアルデヒド溶液にする必要があります。 ホルマリンは、ホルムアルデヒドの飽和水溶液（37重量％、40重量％）にメタノールを10～15％加えたものです。 メタノールはホルムアルデヒドへの重合を遅らせるために添加され、ホルマリンの固定力を低下させる。 ホルマリンは、粉末のパラホルムアルデヒドからアルコールを含まない形で作ることもできる

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