Gertrude ist zum ersten Mal im 1. Akt, Szene 2, zu sehen, als sie versucht, Hamlet über den Verlust seines Vaters hinwegzutrösten, indem sie ihn bittet, zu Hause zu bleiben, anstatt wieder zur Schule nach Wittenberg zu gehen. Ihre Sorge um ihn setzt sich im zweiten Akt fort, als sie sich auf die Seite von König Claudius stellt und Rosencrantz und Guildenstern schickt, um ihren Sohn aufzumuntern. Außerdem schreibt sie Hamlets plötzlichen Wahnsinn nicht Ophelias Zurückweisung zu (wie Polonius meint), sondern sieht die Ursache in seinem Vater, in König Hamlets Tod und in ihrer schnellen, anschließenden Heirat mit Claudius: „Ich bezweifle, dass es nichts anderes ist als die Hauptsache: der Tod seines Vaters und unsere übereilte Heirat.“ Im dritten Akt hört sie eifrig dem Bericht von Rosencrantz und Guildenstern zu, die versuchen, ihn aufzumuntern, und unterstützt den Plan des Königs und Polonius, Hamlet von einem versteckten Aussichtspunkt aus zu beobachten, während er mit Ophelia spricht, in der Hoffnung, dass ihre Anwesenheit ihn heilen wird.
Im nächsten Akt erzählt Gertrude Claudius von Polonius‘ Mord und ist überzeugt, dass Hamlet wirklich verrückt ist. Sie zeigt auch echtes Mitgefühl und Zuneigung, als sie zusammen mit anderen zusieht, wie Ophelia singt und im absoluten Wahnsinn handelt. Bei Ophelias Beerdigung bringt sie ihre frühere Hoffnung zum Ausdruck, dass die junge Frau ihren Sohn hätte heiraten können: „Ich hatte gehofft, dass du die Frau meines Hamlet sein würdest.“ Als Hamlet auftaucht und mit Laertes ringt, bittet sie ihn, aufzuhören und jemanden zu bitten, der ihn zurückhält – mit den Worten, dass er jetzt vielleicht einen Anfall von Wahnsinn habe, der sich aber bald wieder legen werde. Zu Beginn des Stücks liegt Gertrud mehr bei ihrem Mann als bei ihrem Sohn; nach der Szene im Wandschrank ändert sich jedoch die ganze Situation.
In der Schlussszene bemerkt Gertrud, dass Hamlet während des Kampfes mit Laertes müde ist, und bietet ihm an, seine Stirn abzuwischen. Sie trinkt einen Becher mit Gift, den der König für Hamlet bestimmt hat, gegen den Willen des Königs, und stirbt, während sie im Todeskampf schreit:
„Nein, nein, der Trank, mein lieber Hamlet, der Trank, der Trank! Ich bin vergiftet.“
Die Ansichten anderer Figuren über die Königin sind weitgehend negativ. Als der Geist ihres früheren Mannes Hamlet erscheint, beschreibt er sie als „scheinbar tugendhafte Königin“, befiehlt Hamlet aber, sie nicht damit zu konfrontieren und ihr Urteil dem Himmel zu überlassen. Seine Liebe zu ihr, als sie noch lebte, war jedoch wohlwollend, da Hamlet erklärt, dass sein Vater die Elemente zurückgehalten hätte, wenn sie „ihr Gesicht zu grob besuchten“.
Hamlet sieht sie als ein Beispiel für die Schwäche der Frauen (was sich auf seine Beziehung zu Ophelia auswirkt) und ist ständig verletzt, wenn er darüber nachdenkt, wie schnell (weniger als einen Monat) sie wieder geheiratet hat.