Silika ja alumiinioksidi eivät ole ainoat mahdolliset kiinteät faasit. Voidaan ostaa kiinteitä faaseja, joissa on pitkiä hiiliketjuja sidottuna silikahelmiin. Esimerkiksi C18-kolonni sisältää helmiä, joihin on kiinnitetty 18 hiiliketjua. Nämä paikallaan pysyvät faasit ovat piidioksidin tavoin jauheita, ja ne voidaan ladata kolonniin aivan kuten piidioksidi.
C18-kolonni on esimerkki ”käänteisfaasikolonnista”. Käänteisfaasikolonnia käytetään usein polaarisempien liuottimien, kuten veden, metanolin tai asetonitriilin kanssa. Stationäärifaasi on pooliton hiilivety, kun taas liikkuva faasi on poolinen neste.
Samaa lähestymistapaa voidaan käyttää myös TLC:ssä. Jos levylle ruiskutetaan kerros C18-helmiä, voimme eluoida levyn polaarisessa liuottimessa ja erottaa näytteessä olevat yhdisteet toisistaan. Nyt asiat ovat tietysti päinvastoin. Polaarisimmat yhdisteet viettävät eniten aikaa liikkuvassa faasissa ja liikkuvat nopeimmin. Vähiten pooliset yhdisteet viettävät eniten aikaa stationäärifaasissa ja liikkuvat hitaimmin.
Kuva \(\PageIndex{2}\): Sarjakuva käänteisfaasikromatografiasta.
Harjoitus \(\PageIndex{1}\)
Piidioksidipylväässä (SiO2) eluoitiin kolme yhdistettä seuraavassa järjestyksessä heksaani/etyyliasetaattiseoksella: p-dimetyylibentseeni, p-dimetoksibentseeni ja sitten p-metoksifenoli. Minkälainen voisi olla eluoitumisjärjestys C18-kolonnilla?
Vastaus
p-metoksifenoli, sitten p-dimetoksibentseeni, sitten p-dimetyylibentseeni
Harjoitus \(\PageIndex{2}\)
Yrität eluoida näytettä C18-pylväässä käyttäen 20:80 veden ja asetontriilin seosta, mutta yhdisteiden kulkeutuminen pylvään läpi kestää liian kauan. Mitä sinun pitäisi tehdä?
Vastaus
Yhdisteet eivät vietä paljon aikaa liikkuvassa faasissa, ja niillä on paljon suurempi affiniteetti ei-polaariseen stationäärifaasiin; käytä enemmän asetonitriiliä ja vähemmän vettä liikkuvassa faasissa.t.
Yksi käänteisfaasikromatografian eduista on se, että on olemassa monia erilaisia stationäärifaaseja, joista valita. Muuttamalla sitä, millainen ketju helmessä on, voimme muuttaa sitä, kuinka voimakkaasti se vuorovaikuttaa tiettyjen molekyylien kanssa. Ehkä täysin tyydyttynyt hiilivetypakkaus vuorovaikuttaa hyvin näytteessä olevien tyydyttyneiden hiilivetyjen kanssa, jolloin ne eluoituvat hitaammin. Toisaalta ehkä jäykempi pakkaus, joka sisältää aromaattisia aineita, vuorovaikuttaa paremmin näytteessä olevien aromaattisten hiilivetyjen kanssa, jolloin ne eluoituvat hitaammin. Saattaa olla jopa joitakin polaarisia ryhmiä sekoitettuna, jotta vuorovaikutukset sekoittuvat.
Harjoitus \(\PageIndex{3}\)
Paranna järjestys, jossa seuraavat yhdisteet eluoituvat käänteisfaasikolonnista.
- butyylibentseeni ja bentsyyliamiini
- 2-dekanoli ja dekaanihappo
- 1-heptaanoli ja 1-hepteeni
- oktanaali ja metyylioktyylieetteri
Vastaus Vastaus a
bentsyyliamiini, sitten butyylibentseeni
Vastaus b
2–dekanoli sitten dekaanihappo
Vastaus c
1-heptaanoli sitten 1-hepteeni
Vastaus d
oktanaali sitten metyylioktyylieetteri
Attribution
Chris P Schaller, Ph.D., (College of Saint Benedict / Saint John’s University)