La silice et l’alumine ne sont pas les seules phases solides possibles. On peut acheter des phases stationnaires qui ont de longues chaînes de carbone liées à des billes de silice. Par exemple, une colonne C18 contient des perles auxquelles sont attachées des chaînes de 18 atomes de carbone. Ces phases stationnaires sont des poudres, comme la silice, et elles peuvent être chargées dans une colonne tout comme la silice.

Figure \(\PageIndex{1}\) : Dessin humoristique d’une perle de C18

Une colonne de C18 est un exemple de colonne « en phase inverse ». Les colonnes en phase inverse sont souvent utilisées avec des solvants plus polaires comme l’eau, le méthanol ou l’acétonitrile. La phase stationnaire est un hydrocarbure non polaire, tandis que la phase mobile est un liquide polaire.

La même approche peut également être utilisée en CCM. Si une plaque est pulvérisée avec une couche de billes C18, alors nous pouvons éluer la plaque dans un solvant polaire et séparer les composés dans un échantillon. Bien sûr, les choses sont maintenant inversées. Les composés les plus polaires passeront le plus de temps dans la phase mobile et se déplaceront le plus rapidement. Les composés les moins polaires passeront le plus de temps dans la phase stationnaire, et se déplaceront le plus lentement.

Figure \(\PageIndex{2}\) : Une caricature de chromatographie en phase inverse.

Exercice \(\PageIndex{1}\)

Sur une colonne de silice (SiO2), trois composés ont été élués dans l’ordre suivant en utilisant un mélange hexanes / acétate d’éthyle : p-diméthylbenzène, p-diméthoxybenzène, puis p-méthoxyphénol. Quel pourrait être l’ordre d’élution sur une colonne C18 ?

Réponse

p-méthoxyphénol, puis p-diméthoxybenzène, puis p-diméthylbenzène

Exercice \(\PageIndex{2}\)

Vous essayez d’éluer un échantillon sur une colonne C18 en utilisant un mélange 20:80 d’eau:acétontrile, mais les composés mettent trop de temps à passer dans la colonne. Que devez-vous faire ?

Réponse

Les composés ne passent pas beaucoup de temps dans la phase mobile, et ont une affinité beaucoup plus élevée pour la phase stationnaire non polaire ; utilisez plus d’acétonitrile et moins d’eau dans la phase mobile.t.

L’un des avantages de la chromatographie en phase inverse est qu’il existe de nombreux types de phase stationnaire parmi lesquels choisir. En changeant le type de chaîne qui est à la perle, nous pouvons modifier la force de son interaction avec certaines molécules. Peut-être qu’une garniture d’hydrocarbures complètement saturée interagit bien avec les hydrocarbures saturés de l’échantillon, les faisant éluer plus lentement. D’un autre côté, il se peut qu’un emballage plus rigide contenant des aromatiques interagisse mieux avec les hydrocarbures aromatiques de l’échantillon, ce qui les fait éluer plus lentement. On pourrait même avoir quelques groupes polaires mélangés, pour obtenir un mélange d’interactions.

Exercice \(\PageIndex{3}\)

Prédire l’ordre dans lequel les composés suivants élueraient d’une colonne en phase inverse.

  1. butylbenzène et benzylamine
  2. 2-décanol et acide décanoïque
  3. 1-heptanol et 1-heptène
  4. octanal et éther méthyl-octylique

Réponse a

benzylamine puis butylbenzène

Réponse b

2-décanol puis acide décanoïque

Réponse c

1-heptanol puis 1-heptène

Réponse d

octanal puis éther méthylique d’octyle

Attribution

Chris P Schaller, Ph.D., (Collège de Saint Benedict / Université Saint John’s)

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