Krzemionka i tlenek glinu nie są jedynymi możliwymi fazami stałymi. Można nabyć fazy stacjonarne, które mają długie łańcuchy węglowe związane z kulkami krzemionkowymi. Na przykład, kolumna C18 zawiera kulki, które mają 18 łańcuchów węglowych dołączonych do nich. Te fazy stacjonarne są proszkami, podobnie jak krzemionka, i można je załadować do kolumny tak samo jak krzemionkę.
Kolumna C18 jest przykładem kolumny z „fazą odwróconą”. Kolumny z fazą odwróconą są często używane z bardziej polarnymi rozpuszczalnikami, takimi jak woda, metanol lub acetonitryl. Faza stacjonarna jest niepolarnym węglowodorem, podczas gdy faza ruchoma jest polarną cieczą.
To samo podejście może być również stosowane w TLC. Jeśli płytka jest spryskana warstwą kulek C18, wtedy możemy eluować płytkę w polarnym rozpuszczalniku i rozdzielić związki w próbce. Oczywiście, teraz sytuacja jest odwrotna. Najbardziej polarne związki spędzą najwięcej czasu w fazie ruchomej i będą przemieszczać się najszybciej. Najmniej polarne związki spędzą najwięcej czasu w fazie stacjonarnej i będą poruszać się najwolniej.
Rysunek \(\PageIndex{2}): Karykatura chromatografii w odwróconej fazie.
Ćwiczenie \(\PageIndex{1})
Na kolumnie krzemionkowej (SiO2), trzy związki były eluowane w następującej kolejności przy użyciu mieszaniny heksanów / octanu etylu: p-dimetylobenzen, p-dimetoksybenzen, a następnie p-metoksyfenol. Jakiej kolejności elucji można by się spodziewać na kolumnie C18?
Odpowiedź
p-metoksyfenol, następnie p-dimetoksybenzen, potem p-dimetylobenzen
Ćwiczenie rzednie
Próbujesz eluować próbkę na kolumnie C18 używając mieszaniny 20:80 woda:acetontryl, ale związki zbyt długo przechodzą przez kolumnę. Co powinieneś zrobić?
Odpowiedź
Związki nie spędzają dużo czasu w fazie ruchomej i mają znacznie większe powinowactwo do niepolarnej fazy stacjonarnej; użyj więcej acetonitrylu i mniej wody w fazie ruchomej.t.
Jedną z zalet chromatografii fazy odwróconej jest to, że istnieje wiele rodzajów faz stacjonarnych, z których można wybierać. Poprzez zmianę rodzaju łańcucha, który jest do koralika, możemy zmienić, jak silnie będzie oddziaływać z niektórych cząsteczek. Być może całkowicie nasycone opakowanie węglowodorowe dobrze oddziałuje z nasyconymi węglowodorami w próbce, powodując ich wolniejszą elucję. Z drugiej strony, może bardziej sztywne upakowanie, które zawiera aromaty, będzie lepiej oddziaływać z aromatycznymi węglowodorami w próbce, sprawiając, że będą one eluować wolniej. Możemy nawet mieć kilka grup polarnych, aby uzyskać mieszaninę oddziaływań.
Ćwiczenie \(\PageIndex{3})
Zaplanuj kolejność, w jakiej następujące związki będą eluować z kolumny z fazą odwróconą.
- butylobenzen i benzyloamina
- 2-dekanol i kwas dekanowy
- 1-heptanol i 1-hepten
- oktanal i eter metylooktylowy
Odpowiedź a
benzyloamina następnie butylobenzen
Odpowiedź b
2-dekanol, a następnie kwas dekanowy
Odpowiedź c
1-heptanol, a następnie 1-hepten
Odpowiedź d
oktanal, a następnie eter metylooktylowy
Przypisy
Chris P Schaller, Ph.D., (College of Saint Benedict / Saint John’s University)