Silica och aluminiumoxid är inte de enda möjliga fasta faserna. Stationära faser kan köpas som har långa kolkedjor bundna till kiseldioxidpärlor. En C18-kolonn innehåller till exempel pärlor som har 18 kolkedjor knutna till sig. Dessa stationära faser är pulver, liksom kiseldioxid, och de kan laddas i en kolonn precis som kiseldioxid.
En C18-kolonn är ett exempel på en ”omvänd fas”-kolonn. Kolonner med omvänd fas används ofta med mer polära lösningsmedel som vatten, metanol eller acetonitril. Den stationära fasen är ett opolärt kolväte, medan den mobila fasen är en polär vätska.
Samma tillvägagångssätt kan också användas vid TLC. Om en platta sprayas med ett lager av C18-pärlor kan vi eluera plattan i en polär lösningsmedel och separera föreningar i ett prov. Naturligtvis är saker och ting omvända nu. De mest polära föreningarna kommer att tillbringa mest tid i den rörliga fasen och förflytta sig snabbast. De minst polära föreningarna kommer att tillbringa mest tid i den stationära fasen och röra sig långsammast.
Figur \(\PageIndex{2}\): En teckning av kromatografi i omvänd fas.
Övningsuppgift \(\PageIndex{1}\)
På en kolonn av kiseldioxid (SiO2) eluerades tre föreningar i följande ordning med hjälp av en blandning av hexaner och etylacetat: p-dimetylbensen, p-dimetoxibensen och sedan p-metoxifenol. Hur skulle du kunna förvänta dig att elueringsordningen skulle se ut på en C18-kolonn?
Svar
p-metoxifenol, sedan p-dimetoxibensen, sedan p-dimetoxibensen
Övningsuppgift \(\PageIndex{2}\)
Du försöker eluera ett prov på en C18-kolonn med hjälp av en 20:80-blandning av vatten och acetontrile, men föreningarna tar för lång tid på sig att komma igenom kolonnen. Vad ska du göra?
Svar
Föreningarna spenderar inte mycket tid i den rörliga fasen och har en mycket högre affinitet för den opolära stationära fasen; använd mer acetonitril och mindre vatten i den rörliga fasen.t.
En av fördelarna med omvänt fas-kromatografi är att det finns många olika typer av stationära faser att välja mellan. Genom att ändra den typ av kedja som finns på pärlan kan vi ändra hur starkt den kommer att interagera med vissa molekyler. Kanske interagerar en helt mättad kolväteförpackning bra med mättade kolväten i provet och får dem att eluera långsammare. Å andra sidan kanske en styvare förpackning som innehåller aromater interagerar bättre med aromatiska kolväten i provet, vilket gör att dessa elueras långsammare. Vi kanske till och med har några polära grupper blandade, för att få en blandning av interaktioner.
Övningsuppgift \(\PageIndex{3}\)
Förutsäg i vilken ordning följande föreningar skulle eluera från en kolonn med omvänd fas.
- butylbensen och bensylamin
- 2-dekanol och dekansyra
- 1-heptanol och 1-heptene
- oktanal och metyloktyleter
Svar Svar a
benzylamin sedan butylbensen
Svar b
2-decanol sedan dekansyra
Svar c
1-heptanol sedan 1-heptene
Svar d
octanal sedan metyloktyleter
Attribution
Chris P Schaller, Ph.D., (College of Saint Benedict / Saint John’s University)