La sílice y la alúmina no son las únicas fases sólidas posibles. Se pueden adquirir fases estacionarias que tienen largas cadenas de carbono unidas a perlas de sílice. Por ejemplo, una columna C18 contiene perlas que tienen cadenas de 18 carbonos unidas a ellas. Estas fases estacionarias son polvos, como la sílice, y pueden cargarse en una columna al igual que la sílice.
Una columna C18 es un ejemplo de columna de «fase inversa». Las columnas de fase inversa suelen utilizarse con disolventes más polares, como el agua, el metanol o el acetonitrilo. La fase estacionaria es un hidrocarburo no polar, mientras que la fase móvil es un líquido polar.
El mismo enfoque puede utilizarse también en TLC. Si se rocía una placa con una capa de perlas C18, entonces podemos eluir la placa en un disolvente polar y separar los compuestos de una muestra. Por supuesto, ahora las cosas se invierten. Los compuestos más polares pasarán más tiempo en la fase móvil y se moverán más rápidamente. Los compuestos menos polares pasarán más tiempo en la fase estacionaria y se moverán más lentamente.
Figura \N(\PageIndex{2}\N): Una caricatura de cromatografía en fase inversa.
Ejercicio (\PageIndex{1})
En una columna de sílice (SiO2), se eluyeron tres compuestos en el siguiente orden usando una mezcla de hexanos / acetato de etilo: p-dimetilbenceno, p-dimetoxibenceno, y luego p-metoxifenol. Cuál podría esperar que el orden de elución fuera en una columna C18?
Respuesta
p-metoxifenol, luego p-dimetoxibenceno, luego p-dimetilbenceno
Ejercicio \(\PageIndex{2})
Está intentando eluir una muestra en una columna C18 utilizando una mezcla 20:80 de agua:acetontrilo, pero los compuestos están tardando demasiado en pasar por la columna. ¿Qué debería hacer?
Respuesta
Los compuestos no están pasando mucho tiempo en la fase móvil, y tienen una afinidad mucho mayor por la fase estacionaria no polar; utilice más acetonitrilo y menos agua en la fase móvil.t.
Una de las ventajas de la cromatografía de fase inversa es que hay muchos tipos de fase estacionaria entre los que elegir. Cambiando el tipo de cadena que tiene la perla, podemos alterar la fuerza con la que interactuará con ciertas moléculas. Tal vez un empaque de hidrocarburo completamente saturado interactúe bien con los hidrocarburos saturados de la muestra, haciendo que eluyan más lentamente. Por otro lado, puede que un empaquetamiento más rígido que contenga aromáticos interactúe mejor con los hidrocarburos aromáticos de la muestra, haciendo que éstos eluyan más lentamente. Incluso podríamos tener algunos grupos polares mezclados, para obtener una mezcla de interacciones.
Ejercicio (\PageIndex{3})
Predecir el orden en que los siguientes compuestos eluirían de una columna de fase inversa.
- butilbenceno y bencilamina
- 2-decanol y ácido decanoico
- 1-heptanol y 1-hepteno
- octanal y metil-octil-éter
Respuesta a
bencilamina y luego butilbenceno
Respuesta b
2-decanol y luego ácido decanoico
Respuesta c
1-heptanol y luego 1-hepteno
Respuesta d
octanal y luego metil-octil-éter
Atribución
Chris P Schaller, Ph.D., (College of Saint Benedict / Saint John’s University)