A szilícium-dioxid és a timföld nem az egyetlen lehetséges szilárd fázis. Olyan állófázisok is kaphatók, amelyek hosszú szénláncokat kötnek szilikagömbökhöz. A C18 oszlop például olyan gyöngyöket tartalmaz, amelyekhez 18 szénlánc kapcsolódik. Ezek az állófázisok a szilícium-dioxidhoz hasonlóan porszerűek, és ugyanúgy betölthetők az oszlopba, mint a szilícium-dioxid.
A C18-oszlop egy példa a “fordított fázisú” oszlopra. A fordított fázisú oszlopokat gyakran használják polárisabb oldószerekkel, például vízzel, metanollal vagy acetonitrillel. Az állófázis egy nem poláros szénhidrogén, míg a mozgófázis egy poláros folyadék.
Az ugyanez a megközelítés a TLC-ben is alkalmazható. Ha egy lemezt C18 gyöngyökből álló réteggel permetezünk, akkor a lemezt poláros oldószerrel eluálhatjuk, és elválaszthatjuk a mintában lévő vegyületeket. Természetesen a dolgok most fordítottak. A legpolárisabb vegyületek töltik a legtöbb időt a mobilfázisban, és mozognak a leggyorsabban. A legkevésbé poláris vegyületek töltik a legtöbb időt az állófázisban, és mozognak a leglassabban.
Ábra \(\PageIndex{2}\): A fordított fázisú kromatográfia karikatúrája.
GYakorlat \(\PageIndex{1}\)
Szilícium-dioxid (SiO2) oszlopon hexán/etilacetát keverékkel három vegyületet eluáltunk a következő sorrendben: p-dimetilbenzol, p-dimetoxibenzol, majd p-metoxifenol. Milyen sorrendben várható az elúció egy C18 oszlopon?
Válasz
p-metoxifenol, majd p-dimetoxibenzol, majd p-dimetilbenzol
GYakorlat \(\PageIndex{2}\)
Egy mintát próbál elúciózni egy C18 oszlopon víz:acetontril 20:80 arányú keverékével, de a vegyületek túl sokáig nem jutnak át az oszlopon. Mit kell tennie?
Válasz
A vegyületek nem töltenek sok időt a mozgófázisban, és sokkal nagyobb affinitással rendelkeznek a nem poláris állófázishoz; használjon több acetonitrilt és kevesebb vizet a mozgófázisban.t.
A fordított fázisú kromatográfia egyik előnye, hogy sokféle állófázis közül lehet választani. A gyöngyhöz tartozó lánc fajtájának megváltoztatásával megváltoztathatjuk, hogy az milyen erősen lépjen kölcsönhatásba bizonyos molekulákkal. Lehet, hogy egy teljesen telített szénhidrogén-csomagolás jól kölcsönhatásba lép a mintában lévő telített szénhidrogénekkel, így azok lassabban eluálódnak. Másrészt, lehet, hogy egy merevebb, aromás anyagokat tartalmazó csomagolás jobban kölcsönhatásba lép a mintában lévő aromás szénhidrogénekkel, így azok lassabban eluálódnak. Lehet, hogy még néhány poláris csoport is keveredik, hogy a kölcsönhatások keveredjenek.
GYakorlat \(\PageIndex{3}\)
Jósolja meg, hogy a következő vegyületek milyen sorrendben eluálódnának egy fordított fázisú oszlopról.
- butilbenzol és benzil-amin
- 2-decanol és dekánsav
- 1-heptanol és 1-heptén
- oktán és metil-oktil-éter
Válasz a
benzilamin majd butilbenzol
Válasz b
2- és-decanol majd dekánsav
Válasz c
1-heptanol majd 1-heptén
Válasz d
oktán majd metil-oktil-éter
Attribution
Chris P Schaller, Ph.D., (College of Saint Benedict / Saint John’s University)